专利名称：CRISPR/Cas9 介导的大片段 DNA 拼接方法
申请日：2015 年 8 月 26 日
申请号：201510531714.X
专利人：中科院上海生命科学研究院植物生理生态研究所
发明人：覃重军，周见庭，吴荣海，薛小莉
专利状态：专利申请目前实质审查中，尚未授权
专利类型：发明专利
技术应用领域：微生物发酵、医药、食品、保健品、工业酶、化工等领域
技术简介：
本发明提供了一种适用于酵母基因组改造的 CRISPR/CAS9 系统。
专利摘要：
本发明公开了 CRISPR/Cas9 介导的大片段 DNA 拼接方法。具体而言，本发明提供能在酵母中组成型表达 Cas9 的核酸构建物，该核酸构建物含有与 cas9 基因操作性连接的酵母 Tef1 启动子，来自 pBR322 的复制起始位点及其筛选标记和来源于 CEN6 ARS4 的复制区及其筛选标记，所述核酸构建物在酵母中为单拷贝复制，在大肠杆菌中为高拷贝复制。本发明还提供能在酵母中组成型表达 sgRNA 的核酸构建物、作为受体载体使用的核酸构建物以及 DNA 拼接方法。利用本发明可将两个以上待拼接大 DNA 片段直接在酵母菌中一次成功拼接为大质粒，省去了低效率的大片段 DNA 的体外酶切回收及遗传转化等操作，比传统方法更方便高效。
技术成熟度：
小试阶段
合作方式：
转让、许可、合作研发